香菇多糖的纯化

    常用的纯化方法有：沉淀法、柱层析法、制备性高效液相法、制备性区域电泳法、超滤法等。目前多采用各种不同的凝胶层析柱色谱和离子交换柱色谱。

    凝胶色谱是一种分辨率低、载样量少的分离技术，但方法简单、快速。常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(sepharose)，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，使不同大小的多糖分子得到分离纯化。离子交换色谱是通过载体表面带电基团与样品离子和淋洗离子进行可逆交换、离子偶极作用和离子吸附，来实现色谱分离。不同多糖尤其是多糖与蛋白质结合在一起的复合多糖，在一定pH条件下所带电荷不同，根据各多糖上电荷的差异来达到分离目的。燕航等L30 J将香菇多糖粗制品用DEAE-纤维素柱层析，经NaCl洗脱，得到6个香菇多糖级分A～F；然后用sephadex G-200柱进一步纯化香菇多糖B级分，得到香菇多糖亚级分B-1和B-2。邵伟等E19]采用液体发酵培养的方法获得香菇胞内粗多糖，再经DEAE柱层析和Supdex200凝胶层析到一种蛋白多糖复合物。刘美琴等将香菇粗多糖进行DE52柱层析，得到均一的多糖成分，其平均分子量为5．08×105。阮征等用香菇水提物，经过DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-200凝胶柱色谱得到均一多糖级分L-2A。

    超滤技术是一种膜过滤技术，其原理主要是筛分作用，其中分子大小是其分离的主要依据，但分子形状和电荷也起着重要作用。利用膜的选择性，通过在膜两侧存在的能量差而造成溶液中各组分通过膜的迁移速率的不同，实现非均相物系的分离。利用超滤分离技术，易获得多糖粗品，得糖率高，工艺流程简单，工序少，提取时间短。李志洲[321利用超滤膜分离装置进行香菇多糖的提取分离，建立了香菇多糖提取液超滤过程修正凝胶极化模型，这种工艺的香菇多糖提取率达6．10％，多糖粗品含量在90％以上。郑宗昆等采用螺旋卷式超滤器对香菇多糖进行提取研究，结果在此试验范围内，用微滤作预处理的好于离心法处理，用超滤温度为250C，pH值接近浸提介质的pH值，超滤压力为0．15～O．18 MPa，制得的香菇多糖纯度达74．4％，回收率为79．6％。谢红旗等采用截留分子量为50 kD和300 kD的两种陶瓷膜，将预处理过的香菇料液分成三种不同分子量范围的多糖。

香菇多糖的展望

    随着分子生物学的发展和香菇多糖研究的不断深入，科学家们已经开始在基因水平探讨香菇多糖生物活性的机制。多糖生物活性与结构问的关系的研究还落后于核酸与蛋白质的研究。目前主要集中在香菇中β-(1→3)-D-葡聚糖的研究上，其他多糖组分与生物活性之间的关系还有待进一步的明确。目前多糖的提取率普遍不高，提高香菇多糖的提取率已成为多糖产品开发需要解决的一个关键问题。不仅可以考虑将多种提取手段结合起来优化提取工艺，还可以通过遗传育种、基因重组、物种诱变等手段选育出高产多糖的香菇菌株，提高香菇的多糖含量，以增加多糖的提取率，降低生产成本。

    今后对lentinan和其他活性类多糖的研究主要着重于3个方面：(1)多糖生物活性的生理机制的探索。虽然研究和发表的文章很多，但其机理还没有完全搞清楚，需要作进一步的探究；(2)多糖构效关系的研究。多糖是一种承载着巨大构相变量的生物大分子，可以传递细胞之间海量的生物信息，要完全阐明这个关系，单凭生物学的手段是远远不够的，只有通过物理、计算机、数学、化学等综合手段的应用，才能获得突破性的进展和成果，这也必将对21世纪生命科学产生巨大的影响；(3)应用研究。通过化学手段对多糖分子进行改性，使其具有更多的生物活性或者强化已有的生物活性，能够更广泛地应用于临床。

吕国英，范雷法，张作法，潘慧娟

(浙汀省农业科学院园艺研究所，浙江杭州310021)

浙江农业学报2009.2

摘自：创力药业（http://www.china-cl.cn）